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用于检测农药残留的果蝇的乙酰胆碱脂酶及其菌株


成果统计表
成果名称   用于检测农药残留的果蝇的乙酰胆碱脂酶及其菌株
主要作者   王慧等
完成单位   中国科学院上海生命科学研究院
关 键 词   农药检测;乙酰胆碱脂酶传感器
所在地区   上海
成果类别 农业生物技术
成果水平   请选择成果水平
公布年份    2010-06-09
鉴定年份   
成果申请专利
专利号 专利名称
200810201894.5 一种在细胞表面展示外源蛋白的方法及产品
200810201894.5 一种在细胞表面展示外源蛋白的方法及产品
是否可转化   yes
单位名称   
联 系 人   陈秀娟
电子邮件   chenxiujuan@sibs.ac.cn
电  话   021-54920135
应用前景   有机磷或氨基甲酸酯类杀虫剂是在农业生产中被广泛使用的一类农药,为粮食丰产和农业发展提供保证。但由于农药的不合理使用,许多食品中有机磷或氨基甲酸酯类农药残留超标,导致急性中毒事件时有发生,严重威胁着人们的身体健康和农产品在国际市场的竞争力。 目前常用的有机磷或氨基甲酸酯类农药检测方法有免疫学检测方法和酶抑制法。传统的免疫学检测技术因其抗体特异性,不能同时检测多种不同种类的农药,在实际应用中受到限制。而酶抑制法主要利用了乙酰胆碱酯酶对有机磷或氨基甲酸酯类农药的敏感性,具有简便、灵敏等优势,成为应用较为普遍的农药残留快速检测技术。我国农业部农药检定所依据酶抑制法原理制定了涕灭威、克百威等10种氨基甲酸酯类农药和氧化乐果、甲胺磷等8种有机磷类农药的快速检测农业行业标准,并于2004年年初上升为国家标准执行。目前在售的检测农药的仪器多数只达到目前我国的检测标准(约为0.1-10mg/L),而国际上规定的食品中农药的限量标准一般是10μg/L(如欧盟和韩国),出口农产品(如茶叶)受到该标准的限制,因此未来我国的检测标准也极有可能提高为10μg/L。 目前大部分用于农药检测的乙酰胆碱酯酶都是从家蝇或电鳗中提取获得,来源有限,纯化过程复杂,且纯度和对农药的敏感性都受到很大限制。这种游离形式的乙酰胆碱酯酶稳定性差,极易失活。具文献报道,在众多种属来源的乙酰胆碱脂酶中,果蝇乙酰胆碱脂酶对农药的敏感性最高。 本发明为表达在酵母细胞表面的果蝇乙酰胆碱脂酶。该酿酒酵母菌株用以半乳糖(Gal)为碳源的SC培养基诱导表达。具体使用该酶检测农药残留方法为:将该表面展示有乙酰胆碱酯酶的细胞固定于固相载体或悬浮于与所述细胞相容性的介质中,形成检测体系;在该检测体系中加入待测样品并混合;检测体系中乙酰胆碱酯酶的活性,从而确定待测样品中是否含有有机磷或氨基甲酸酯类农药或其含量。测定乙酰胆碱酯酶的酶活性通常有压电、Ellman荧光、电化学等方法。例如Ellman荧光法的原理为:乙酰胆碱酯酶可催化乙酰胆碱水解,其水解产物可与显色剂反应,产生显色物质,用分光光度计测定吸光度随时间的变化值,计算出抑制率,通过抑制率可以判定出产品中是否存在有机磷或氨基甲酸酯类农药以及存在量。电化学法得益于微电子技术近四十年来的迅猛发展以及其在乙酰胆碱脂酶传感器上超过20年的研究与运用,其抗干扰能力和灵敏度都得到了长足的进步。目前乙酰胆碱脂酶传感器的到广泛的研究与应用。本发明的酶也可被应用于生物传感器。
摘  要   农药检测;乙酰胆碱脂酶传感器
展示方式   

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